高壓蒸汽滅菌和常壓滅菌及其關鍵環節

高壓蒸汽滅菌和常壓滅菌及其關鍵環節

高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

注意:完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關閉放氣閥。關閥再通電后，壓力表上升達到0.1MPa時,開始計時，維持壓力0.1～0.15MPa 20分鐘。
到達保壓時間后，即可切斷電源，在壓力降到0.5MPa，可緩慢放出蒸氣，應注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零后，才能開蓋，取出培養基，擺在平臺上，以待冷凝。不可久不放氣，引起培養基成分變化，以至培養基無法擺斜面 。一旦放置過久，由于鍋爐內有負壓，蓋子打不開，只要將放氣閥打開，大氣壓入，內外壓力平衡，蓋子便易打開了。
對高壓滅菌后不變質的物品，如無菌水、栽培介質、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養基中的成分變質或效力降低，不能隨意延長時間。


常壓濕熱滅菌法
通過熱蒸汽或沸水使蛋白質變性而殺滅微生物的方法。濕熱穿透力強，滅菌效果較干熱好。
①煮沸或流通蒸汽滅菌：常壓下沸水和蒸汽的溫度是100℃，一般處理30~60min可殺死細菌繁殖體，但不能完全殺滅芽孢。此法適用于不能高壓蒸汽滅菌的物品。
②低溫間隙滅菌（巴斯德滅菌法）：將物品先用60~80℃加熱（或煮沸）1h，然后置20~25
℃保存24h（或常溫過夜），使其中殘存的芽孢萌發成繁殖體，再用以上條件滅菌，如此反復三次。本法適用于不耐高溫或高溫下易變質的物品，但很費時。



常壓滅菌還可以是射線滅菌，化學滅菌，巴氏消毒等方法。

化學滅菌法 利用化學試劑形成的氣體來殺滅微生物的方法。常用的滅菌劑為環氧乙烷（又稱氧化乙烯）。環氧乙烷是廣譜殺菌劑，能殺滅細菌、芽孢和多種病毒，還能殺死昆蟲及蟲卵。但由于環氧乙烷易燃易爆且有毒（有致變異性），用于藥品方面極有限，多用于醫療器械、塑料制品等滅菌。（不能用于橡膠和乳膠手套，能將其溶解。）
4）濾過除菌法 利用細菌不能通過致密具孔濾材的原理，除去對熱不穩定的藥品溶液或液體物質中的細菌的方法。過濾法一般只能除菌，不能除去支原體和病毒。
過濾除菌的效果與濾膜的性能、孔徑的大小、密度、濾膜的厚度等因素有關。
濾過除菌法要求最終過濾的濾膜孔徑為0.22μm。由于各廠家生產的相同規格的濾膜質量并不一致，為了保證除菌效果，在使用前后應檢查濾器的完好性（如壓力維持試驗或起泡點試驗）。
一個過濾器的使用時間應根據品種驗證后確定，一般不應超過8小時。
5）輻射滅菌法 輻射有兩種類型：一種是電磁波輻射，如紫外線、紅外線、微波；一種是電離輻射，如可引起被照射物電離的X射線、γ射線。
①紫外線：紫外光波長在136~390nm之間，其中260nm左右能破壞核酸，殺菌作用最強。另外，空氣中的氧受紫外線照射后，可微量轉變為臭氧共同起殺菌作用。紫外線消毒的效果與光源的功率、光源與被照射物的距離、照射時間、溫度和濕度等因素有關。我國規定紫外燈照射強度在距離1m處不低于70μW/cm2（以紫外線測強儀測定）。在操作面上要求強度達40μW/cm2以上。一般每10m2裝30W燈管1支，工作前開30~60min。
紫外燈的輸出功率隨使用時間增加而降低。國產紫外燈的平均壽命（點到70%額定功率的時間）一般為2000h，超過平均壽命時，就達不到預期效果，必須更換。
紫外線的穿透力很弱，不能穿透一般包裝材料，如玻璃、塑料薄膜、紙等。玻璃能強烈吸收小于350nm的紫外線，石英玻璃能吸收小于200nm的紫外線。因此，它主要用于空氣和物體表面消毒，特制的紫外燈裝置也可用于水的消毒。
紫外線對眼、皮膚有損壞，照射過程中產生的臭氧對眼、鼻腔有刺激，臭氧過多時使人頭暈、胸悶、血壓下降。
②紅外線：通過加熱碳化硅板產生的輻射熱能，由空氣傳導加熱滅菌。如紅外線烤箱，溫度可達180℃左右。熱效應特點是由表及里。
③微波：微波滅菌主要是因其熱效應。微波加熱升溫快，溫度高且均勻，殺菌作用強。熱效應特點是由里及表。不同性質的物品吸收微波的能力不同，其熱效應和消毒效果也不同。
微波有一定穿透力，但不強。微波對人體有害，要注意防護。
④60Co滅菌：放射性同位素60Co（或137Cs）衰變時可放射出γ射線，γ射線的能量高、穿透力強，可使細胞內各種活性物質發生化學變化，從而使細菌損傷或死亡。
經60Co輻射滅菌的物品溫度升高很少，一般僅約5℃，故又稱“冷滅菌”。
60Co輻射存在兩個方面的安全問題：一是輻射的直接作用。γ射線對人體細胞同樣有害；二是經過輻射的食品、藥品的安全性。1984年美國農業部食品安全實驗室用輻射處理的雞肉喂飼小鼠，發現患睪丸腫瘤增加，包括加重癌病損害。因此60Co輻射用于食品和藥品都應經過安全試驗，進行科學的、全面的評價，高劑量的輻射藥品更應慎重。