怎樣進行培養基高壓濕熱滅菌

怎樣進行培養基高壓濕熱滅菌
培養基裝管裝瓶(袋)后，應立即進行消毒滅菌，如滅菌不徹底，就容易產生雜菌，給生產造成損失。

(一)母種培養基滅菌法
    母種培養基滅菌一般用手提式高壓鍋。滅菌時將試管7～10支扎成一捆，再用防潮紙或牛皮紙包住試管棉塞，管口朝上，防止滅菌時棉塞潮濕。高壓滅菌的時間，在1.2kg～1.5kg/cm2壓力下保持15～20分鐘即可。但在使用高壓鍋滅菌時還應注意如下事項：
    1.滅菌時鍋中水要放至水線為止。如放水過少易引起燒干及燒焦培養基；如放水過多，棉塞易潮濕，以后易感染雜菌。
    2.鍋內的冷空氣必須排除干凈，否則達不到滅菌的溫度。排除鍋內冷空氣的方法有兩種，一是將滅菌鍋升火后，從開始出氣起，經5分鐘左右的排氣，至從排氣閥出的氣達到直噴時，再關閉排氣閥；另外一種是將排氣閥關閉升火，待壓力升到0.5kg/cm2時，打開排氣閥，使指針降落到“0”后，再關閉氣閥，燒至所需壓力。
    3.滅菌時間不易過長或過短，過長養分易被破壞，培養基顏色發黃，對菌絲生長不利；過短則達不到滅菌的效果。滅菌結束后，放氣速度不能太快，宜逐漸進行，使指針慢慢下降到“0”，才揭開鍋蓋，否則棉塞容易沖出試管。
    在沒有高壓鍋的條件下，可以用土蒸汽鍋滅菌，但要相應延長滅菌時間，在100℃下的溫度應保持4～6小時。為了滅菌徹底，可采用間歇滅菌法，每天水燒開后蒸煮1小時(100℃)，連續三天。
    培養基滅菌結束后，應立即取出試管直立放置2～3分鐘，待試管壁上的水珠回到培養基內后，再趁熱擱置斜面。這樣，試管壁上不會有大量的水珠，溫度適當。斜放時，一般使斜面為試管總長的二分之一至三分之一。放好后，再用紗布覆蓋，防止冷卻過程中因溫度急劇變化而使管壁形成水珠。
    經滅菌后的斜面試管，必須在接種前于每一批或每鍋中取出3～4支，放在28℃～30℃的恒溫箱中培養2～3天作空白試驗。經培養后，斜面仍光潔透明，無雜菌或細菌出現，則表示滅菌徹底，可作接種用。如發現雜菌，則應找出原因，并將這批試管重新滅菌一次后方可使用。

(二)原種、栽培種的高溫滅菌
    原種、栽培種所需的數量多，滅菌一般采用較大的立式壓力蒸汽滅菌器。采用高壓蒸汽鍋進行濕熱滅菌時，升溫火力應逐漸加大，以防鍋內溫差變化太大，引起玻璃瓶炸裂破損。當壓力開始升到0.5kg/cm2時，即打開排氣閥排出冷氣，待冷空氣放盡后，再關上排氣閥重新升溫，燒至所需壓力。
    高壓滅菌所需要的時間，應根據培養基原料的種類和生熟程度來決定長短。木屑、棉殼、蔗渣和種木為主料的培養基滅菌時的蒸汽壓力要求達到1.5kg/cm2，保持60分鐘；稻草培養基和糞草培養基，在同上的壓力下，保持90分鐘；而麥粒培養基則要保持120分鐘，才能達到滅菌效果。
    采用土鍋滅菌時，在98℃～100℃的溫度下，需連續滅菌6～8小時；麥粒培養基的滅菌時間須達12小時為宜。停火后再燜蒸3～4小時才能出瓶(袋)。
    采用塑料薄膜袋裝菌種培養基滅菌時，可按以上方法進行滅菌。聚乙烯耐壓，耐溫性能差，故只能采用常壓滅菌，100℃保持8～12小時。聚丙烯塑料薄膜耐溫、耐壓性能好，可在1.5kg/cm2壓力下保持2小時，滅菌徹底且不會破裂。滅菌后不要立即打開鍋蓋，待溫度下降至50℃時趁熱開鍋取出，這樣可減少每包粘連一起的現象。
    培養基滅菌完畢從鍋中取出后，應放于清潔、涼爽、干燥的室內進行冷卻待接，并在棉塞上噴5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液，以防雜菌感染。