植物組織培養室的滅菌

植物組織培養室的滅菌
一、目的要求
1、通過實驗，培養學生良好的衛生觀念，確立組織培養的無菌意識。
2、掌握組織培養室的消毒及滅菌方法。
3、掌握培養用具的干熱滅菌的一般操作技術。
二、儀器與用具
1、用具：噴霧器、工作服、口罩、手套等。
2、藥品：2%新潔爾滅，高錳酸鉀，甲醛，70%酒精。
三、方法步驟
（一）植物組織培養室的滅菌
1、地面、墻壁和工作臺的滅菌：用2%新潔爾滅噴霧。
（1）配方：取新潔爾滅原液20ml，加水980ml，配成2%新潔爾滅溶液。
（2）方法：將配好的2%新潔爾滅溶液倒入噴霧器內，進行均勻噴霧。
（3）注意事項：
①墻壁、角落、地面噴霧要均勻，不要遺漏；
②注意安全，在噴房頂時，要特別小心，防止藥液霧滴掉入眼睛。
2、無菌室和培養室的滅菌：用甲醛和高錳酸鉀熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空間用甲醛10ml加高錳酸鉀5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。然后在房子中間放一口缸或大燒杯，將稱好的高錳酸鉀放入缸內，再把已稱量的甲醛溶液慢慢倒入缸內，完畢，人迅速離開，并關上門，密封3天。
（3）注意事項：
①操作前要戴好口罩及手套；
②倒入甲醛時要小心，因為甲醛遇到高錳酸鉀會迅速沸騰，并產生大量煙霧。操作時人要迅速避開煙霧；
③3天后，打開房間，搬走費液缸；一周后，方可進入操作。
3、在已經熏蒸過的房間內，用70%酒精紗布擦洗培養架、工作臺。
4、用紫外燈照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精噴霧，使空間灰塵落下。
（二）培養基的滅菌——高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌法）
（1）洗滌：把組織培養基用的培養皿、三角瓶、試管等玻璃器皿進行徹底清洗。自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮紙、報紙、紗布或錫箔紙把玻璃器皿和金屬器械分別包扎好。
（3）裝水：在壓力蒸汽滅菌器內裝入一定量的水（水要淹沒電熱絲）。（切忌干燒！）
（4）裝物品：在滅菌鍋內放入含培養基的培養瓶或三角瓶、裝蒸餾水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金屬器械等。
（5）滅菌：將排氣閥開著，加熱，直至鍋內釋放出大量水蒸氣（此時水蒸氣橫向噴出），再關閉閥們；或者當鍋內壓力升至49.0KPa時，開啟排氣閥，將鍋內的冷空氣全部排出。當鍋內壓力達到108KPa時，溫度為121℃時，維持15-20分鐘，即可達到滅菌的目的。（若滅菌時間過長，會使培養基中的某些成分變性失效。）切斷電源，讓滅菌鍋自然冷卻。
注意：①先打開放氣閥，再打開鍋蓋。（以免鍋內壓力大而爆炸！）
②開蓋后應盡快轉移培養瓶，使培養瓶冷卻、凝固。一般應將滅菌后的培養瓶儲藏于30℃以下的室內，最好儲藏在4-10℃的條件下。
③某些生長調節劑如IAA、ZT、ABA等以及某些維生素遇熱是不穩定的，不能同培養基一起高壓滅菌，而需要進行過濾滅菌。
2、培養用具的滅菌——干熱滅菌法
（1）玻璃器皿的滅菌：濕熱滅菌法或干熱滅菌法。
（2）金屬器械的滅菌：干熱滅菌或火焰滅菌法。
（3）布質制品的滅菌：均用濕熱滅菌法。（注意：布質制品絕不能干熱滅菌！）
干熱滅菌方法：
（1）洗滌：把組織培養用的培養皿、三角瓶、試管、移液管等玻璃器皿進行徹底清洗。（2）包扎：玻璃器皿可放在大的玻璃容器中，金屬器械可放在金屬盒內。
（3）滅菌：器皿在烘箱中，150℃，干熱滅菌1小時；或120℃，2小時。滅菌完畢，待冷卻后取出。