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環氧乙烷壓力蒸汽滅菌器滅菌試驗操作程序

2009-04-19

環氧乙烷壓力蒸汽滅菌器滅菌試驗操作程序
 

(1) 根據試驗要求,制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內密封包裝,每袋 2 片。每次試驗用 20 袋。

(2) 將滅菌器上、中、下 3 層,每層內、中、外各設一點,共設 9 點。每點物品中間布放1 袋,共需 18 袋試驗菌片。另將一袋(2 片)菌片放置在室溫條件下作為陽性對照。

(3)按使用說明書所規定的環氧乙烷濃度、作用時間、柜內的溫度和相對濕度,在滿載條件下進行環氧乙烷滅菌處理。滿載用物品,隨滅菌器用途而定。處理完畢,取出菌片,分別移種于 5 ML 營養肉湯培養基中,置 37℃ 培養箱內培養,7 D后觀察最終結果(定性培養檢測)。

對難以判斷結果的營養肉湯管,取其中 0.2ML 懸液接種營養瓊脂平板, 用無菌L 棒涂抹均勻, 置 37℃ 培養箱內培養。48H后涂片染色,顯微鏡下觀察菌落形態,或進一步做其他試驗,判斷有無生長或生長的是否為試驗菌。若為非試驗菌,則應重新進行試驗。

(4) 測試中,應同時設立定性和定量陽性對照組(菌片對照)與陰性對照組(培養基對照)。

(5) 定量陽性對照組,以同批試驗用菌片置室溫下,待消毒或滅菌試驗組達規定作用時間后,立即將該菌片 2 片分別放入含 5.0ML PBS 試管中,各振敲 80 下。取洗液進行活菌培養計數。

(6) 定性陽性對照組,以同批試驗用菌片置室溫下,待滅菌試驗組達規定作用時間后,立即將該菌片 2 片,分別接種于 5.0ML 營養肉湯培養基,放入溫箱中作定性培養,觀察有細菌生長情況。

(7) 陰性對照組,以同批次試驗用未染菌樣片 2 片,分別接種于 5.0ML營養肉湯培養基,同時將未接種過的營養肉湯培養基放入培養箱中作定性培養,觀察有無細菌生長。

(8) 試驗重復 5 次。

(9)在5次試驗中,每次試驗中的陽性對照菌片,回收菌量均應在5×`10^5`CFU/片~5×`10^6`CFU/片;定性陽性對照組,細菌生長良好;陰性對照應無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結果,試驗作廢,重新進行。

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