MS培養基的配制與滅菌
2010-06-24
MS培養基的配制與滅菌
一、目的要求
通過MS固體培養基的配制，掌握配制培養基的基本技能。
二、儀器與用具
1、儀器：酸度計或pH試紙、電磁攪拌器、電爐
2、用具：壓力蒸汽滅菌器、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培養瓶（三角瓶）、燒杯、標簽
3、試劑：配制MS培養基的各種母液、生長調節劑、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、0.1 N 、0.5N NaOH，0.1 N 、0.5N HCl
三、方法步驟
（一）MS固體培養基的配制
1、將配制好的MS培養基母液從冰箱中取出，按順序排列，并逐一檢查是否沉淀或變色，避免使用已失效的母液。
2、取少量的蒸餾水（約為配制培養基量的2/3）加入燒杯中。
注意：配500ml培養基用1000ml燒杯。
3、按母液順序和規定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入燒杯中。
如配制1000ml培養基：
需：MS大量元素母液 100ml
MS微量元素母液 10ml
MS鐵鹽母液 10ml
MS有機物母液 10ml
4、通過計算，用微量移液器取所需的各種生長調節劑母液。
5、加入蔗糖（30g/L），溶解。
6、定容：用容量瓶。
7、調pH值：一般pH=5.8。
用0.1 N 和0.5N 的NaOH和HCl 將pH調至所需的數值。
注意：①經壓力蒸汽滅菌器滅菌后，培養基的pH值會下降0.2—0.8，故調整后的pH值應高于目標pH值0.5個單位。
②pH值的大小會影響瓊脂的凝固能力，一般當pH大于6.0時，培養基將會變硬；低于5.0時，瓊脂就不能很好地凝固。
③如果pH值與所需的數值相差很大，可先用0.5N的NaOH或HCl調節，至接近時，再用0.1N的酸、堿調節。以免加入過量的水溶液，導致溶液體積增大，培養基不能很好地凝固（因加入的瓊脂量一定）。
8、分裝到大三角瓶中（500ml、1000ml）。
9、加瓊脂（6-10g/L）。常用6.6--7 g/L
10、封口：用棉塞或錫箔紙、牛皮紙。注明培養基名稱、配制時間。
或者：5、加入蔗糖。
6、加瓊脂，煮沸1-2分鐘（熔化瓊脂）。
7、定容，pH值。
8、分注到培養瓶中。100-150ml培養瓶每瓶裝入20-35ml左右的培養基。
（二） MS固體培養基的滅菌——高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌法）
1、洗滌：把組織培養基用的培養皿、三角瓶、試管等玻璃器皿進行徹底清洗。自然晾干或烘箱干燥。
2、包扎：用牛皮紙、報紙、紗布或錫箔紙把玻璃器皿和金屬器械分別包扎好。
3、裝水：在壓力蒸汽滅菌器內裝入一定量的水（水要淹沒電熱絲）。（切忌干燒！）
4、裝物品：在壓力蒸汽滅菌器內放入含培養基的培養瓶或三角瓶、裝蒸餾水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金屬器械等。
5、滅菌：將排氣閥開著，加熱，直至鍋內釋放出大量水蒸氣（此時水蒸氣橫向噴出），再關閉閥們；或者當鍋內壓力升至49.0KPa時，開啟排氣閥，將鍋內的冷空氣全部排出。當鍋內壓力達到108KPa時，溫度為121℃時，維持15-20分鐘，即可達到滅菌的目的。（若滅菌時間過長，會使培養基中的某些成分變性失效。）切斷電源，讓滅菌鍋自然冷卻。
注意：①先打開放氣閥，再打開鍋蓋。（以免鍋內壓力大而爆炸！）
②開蓋后應盡快轉移培養瓶，使培養瓶冷卻、凝固。一般應將滅菌后的培養瓶儲藏于30℃以下的室內，最好儲藏在4-10℃的條件下。
③某些生長調節劑如IAA、ZT、ABA等以及某些維生素遇熱是不穩定的，不能同培養基一起高壓滅菌，而需要進行過濾滅菌。