培養基的高壓蒸汽滅菌

培養基的高壓蒸汽滅菌
滅菌原理：水的沸點可隨壓力的增加而提高，當高壓蒸汽滅菌鍋中水煮沸時，因鍋是密閉的，蒸汽不能溢出，而使壓力增加，水的沸點和溫度也隨之增加。因此，高壓蒸汽滅菌是利用高壓蒸汽產生的高溫，以及熱蒸汽的穿透能力來達到滅菌的目的。一般在0.1Mpa（15lb/in2）的壓力時，溫度可達121℃只要維持15~20min，就可殺死一切微生物的營養體和它們的各種孢子。

    滅菌方法：

加水于滅菌器內到規定的水平面。
需滅菌的物品（分裝在試管、三角燒瓶中的固、液體培養基），棉塞、硅膠泡沫塞等用防潮紙包好（防止鍋內水汽把棉塞淋濕），放入滅菌鍋內的套筒中。擺放要疏松，不可太擠，否則阻礙蒸汽流通，影響滅菌效果。
將滅菌鍋蓋的排氣管插人套筒側壁的凹槽內，關閉滅菌鍋蓋旋緊螺栓，切勿漏氣。
打開放氣閥，加熱，熱蒸汽上升，以排除鍋內冷空氣，排氣約5~ l0min，關閉放氣閥。
關閉放氣閥后，整個滅菌鍋成為密閉狀態，而蒸汽又不斷增多，這時壓力和溫度都上升，直至壓力表指針達到所需壓力時，開始計時，通過調節熱源，維持此壓力到所需時間。
滅菌完畢，待壓力自然降至0時，打開放氣閥，注意不能打開過早，否則突然降壓致使培養基沖騰，使棉塞、硅膠泡沫塞沾污，甚至沖出容器以外。
打開滅菌鍋蓋，取出已滅菌的器皿及培養基。
滅菌鍋用完后，將鍋內剩余的水倒掉，以免日久腐蝕。
3.微生物的分離與純化

    借助于劃線將混雜的細菌材料逐步稀釋，最后在瓊脂平板上分散開來，使之出現單一菌落而達到分離純化的目的。

4. 注意事項

    1.要嚴格按配方配制。

    2.調pH不要過頭。

    3.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時降壓回零取物。

    4. 劃線法分離純化微生物注意各區勿相互交叉。

5. 示教內容：

    微生物的分離純化